Validação, por PCR quantitativo, da expressão aumentada de genes no nemátode da madeira do pinheiro (NMP) em resposta ao silenciamento de proteínas zinc finger.

Abstract

As proteínas zinc finger estão entre as proteínas mais abundantes nos genomas eucarióticos. Muitas destas proteínas são fatores de transcrição (FT) que reconhecem e ligam-se a sequências específicas do DNA, exercendo uma função da regulação da expressão genética. Estudos anteriores de RNAseq revelaram uma expressão elevada destes FT durante a infeção da planta com o nemátode fitoparasita Bursaphelenchus xylophilus (causador da doença da murchidão do pinheiro). A expressão destes FT foi silenciada no nemátode e pretende-se agora com esta proposta de estágio validar a expressão de genes que se prevê diminuída como consequência do silenciamento dos FT. Pretende-se igualmente identificar as vias metabólicas nas quais estes genes participam. As técnicas laboratoriais a realizar incluem: isolamento de DNA, PCR convencional, eletroforese em gel de agarose, síntese de cDNA, PCR quantitativo (real time PCR). A análise da expressão relativa por RT-qPCR demonstrou uma redução significativa na expressão dos genes BXY262000 e BXY47000, com diminuições de aproximadamente 35 e 14 vezes, respetivamente, após o silenciamento do fator de transcrição. Estes resultados indicam que ambos os genes podem ser regulados positivamente pelo zinc finger C2H2.