Avaliação do potencial nematodicida de Bacillus spp. no nemátode das lesões radiculares Pratylenchus penetrans

Abstract

O nemátode das lesões radiculares Pratylenchus penetrans é uma das espécies mais problemáticas deste grupo de nemátodes fitoparasitas, e encontra-se distribuída por todo o mundo. O uso de pesticidas é o principal sistema de proteção de culturas agrícolas utilizado para controlar os danos originados por estes parasitas. No entanto, o biocontrolo tem-se mostrado um método alternativo bastante eficaz. A contínua restrição do uso da maior parte dos pesticidas e ainda a procura de uma estratégia menos agressiva a nível ambiental demonstraram que existem agentes biológicos com potencial nematodicida, nomeadamente bactérias do gênero Bacillus, possíveis de integrar nas medidas de controlo dos nemátodes fitoparasitas. Neste contexto, o objetivo principal deste trabalho consistiu no estudo do potencial nematodicida de bactérias do género Bacillus no nemátode das lesões radiculares P. penetrans. Para atingir esta finalidade foram utilizadas metodologias em diversas áreas científicas: i) Microbiologia, como a preparação de meios de cultura sólidos e líquidos, obtenção de culturas puras de bactérias, crescimento de bactérias em meio líquido, e obtenção de extratos bacterianos por lise (lisados) e por filtração (filtrados); ii) Biologia molecular, como a extração, quantificação de gDNA, amplificação do gene 16S rRNA por PCR e posterior sequenciação Sanger; iii) Análise bioinformática de sequências para a construção de uma árvore filogenética; e iv) Nematologia, extração e quantificação de nemátodes e ensaios in vitro de lisados e filtrados bacterianos para avaliar o potencial nematodicida. Pela análise do gene marcador 16S rRNA foi possível identificar taxonomicamente alguns dos isolados estudados: o isolado MABNRO1 como Priestia aryabhattai, o isolado 4810 como Cytobacillus firmus, o isolado 14C48 como Paenibacillus lautus e o isolado 13C9 como Bacillus thuringiensis. Os restantes isolados foram identificados como pertencentes ao complexo de espécies Bacillus subtilis, sendo apenas referidos como Bacillus sp. Relativamente aos ensaios in vitro, observou-se que após 24h os lisados bacterianos de todos os isolados neste estudo não apresentavam qualquer efeito nematodicida no P. penetrans. Contudo, os filtrados bacterianos de alguns dos isolados apresentaram resultados promissores relativamente ao seu efeito nematodicida, nomeadamente o Bacillus sp. 14C2 e o 14C26, ambos do complexo da espécie Bacillus subtilis.