Expressão diferencial de genes na glândula mamária de Ovelhas Churra em diferentes estados produtivos

Abstract

Estudou-se a expressão diferencial de genes na glândula mamária de nove ovelhas da raça Churra em diferentes estados produtivos: não-lactentes, lactentes com elevada e baixa produção de leite. Utilizando a técnica de "differential display", por amostra de RNA total, realizou-se a reacção de transcriptase reversa (três primers-"âncora") e a reacção de amplificação da polimerase (oito primers-"arbitrários"). Após electroforese detectaram-se 21 bandas de cDNA potencialmente interessantes. Após clonagem e sequenciação escolheram-se onze bandas para confirmar a expressão diferencial com "Northern blot". Os resultados não permitiram distinguir expressão diferencial em quatro bandas, mas confirmaram a expressão mais intensa de seis mRNA em animais lactentes que apresentam homologia com genes que codificam proteínas do leite, reguladores do volume celular e relacionados com a actividade metabólica. O mRNA expresso intensamente em animais não-lactentes parece ser codificado por um gene da família de carreira de solutos. Identificaram-se assim genes potencialmente responsáveis pela productividade leiteira. ### Abstract - Mammary glands of nine "Churra" sheep at three productive stages (dry period, lactating with low and high milk yield) were used to study differential gene expression. According to the differential display technique, three different anchor-primers and eight arbitrary primers from each RNA sample were used in reverse transcription and amplification steps, respectively. Following electrophoresis, 21 cDNA bands of potential interest were detected. These bands were cloned and sequenced; eleven of them, considered as potentially interesting candidates, were chosen and further characterized by Northern blot. Four transcripts showed no marked differences among groups. There were six up-regulated mRNAs which exhibited significant homology with milk proteins genes and genes related to energy metabolism and cellular volume. A down-regulated mRNA was found which could be related with the solute carrier family genes, although BLAST analysis was not conclusive. Therefore, genes potentially related with milk production have been detected.