Caracterização Morfológica das Lesões de Tipo Neoplásico em Vitelos Infectados por Theileria annulata

Abstract

0 presente trabalho descreve 16 casos de infecções agudas fatais pelo protozoário Theileria annulata em vitelos (idade ≤ 4 meses), que ocorreram no sul de Portugal. Os animais apresentaram intensa infestação por carraças do género Hyalommma e exibiram nódulos multifocais, dispersos na pele e linfoadenomegália generalizada, semelhante a um linfoma maligno multicêntrico. Nos esfregaços de sangue e de linfonodo foram observadas formas de Theileria annulata. Na necrápsia foram identificados nódulos hemorrágicos, ou de halo hemorrágico, na pele, tecido subcutâneo, músculos esqueléticos, músculo cardíaco, faringe, traqueia e serosa intestinal. Histologicamente estes nódulos eram constituídos por células redondas, grandes, semelhantes a células linfoblásticas neoplásicas. Para identificação imunohistoquímica (MC) das células que constituíam as lesões utilizaram-se em fragmentos de pele, tecido muscular esquelético e linfonodos, dois anticorpos monoclonais (anti-CD79acy e anti-proteína mielomonocítica L1) e um policlonal (anti-CD3), respectivamente, para linfócitos B, macrófagos e linfócitos T. As células identificadas eram maioritariamente linfócitos T e macrófagos e mais raramente linfócitos B. Os esquizontes de Theileria annulata foram identificados por IHC através do uso de dois anticorpos monoclonais (1C7 e 1C12) e um anticorpo policlonal (82185), anti-Theileria annulata. Foi realizado estudo ultraestrutural (microscopia electrónica de transmissão) das lesões nodulares, confirmando-se a presença de formas compatíveis com Theileria annulata no citoplasma de macrófagos. A análise do ácido desoxirribonucleico mitocondrial (ADNmt; fragmentos da região de controlo hipervariável D-loop) permitiu o estudo preliminar da clonalidade das células presentes nas lesões. As alterações observadas nos diferentes órgãos e tecidos parecem resultar da proliferação e disseminação de macrófagos infectados, produtores de citoquinas, que estimulam a multiplicação descontrolada de linfócitos T. /ABSTRACT - The present work describes 16 cases of acute lethal infection by protozoan Theileria annulata in calves (≤4 months of age), occurring in the south of Portugal. Infestation with ticks (genus Nyalomma) was intense. The calves developed multifocal to coalescent nodular skin lesions and lymph node enlargement, similar to multicentric malignant lymphoma. Theileria annulata was seen in blood and lymph node smears. At necropsy, hemorrhagic nodules or nodules with a hemorrhagic halo were seen, particularly in the skin, subcutaneous tissue, skeletal and cardiac muscle, pharynx, trachea and intestinal serosa. Histologically the nodules were formed by large, round, lymphoblast neoplastic-like cells. Immunohistochemistry (IHC) was used for labelling in sections of skin and skeletal muscle nodules and lymph node with two monoclonal primary antibodies (anti-CD79acy and anti-myelomonocytic L1 protein) and one polyclonal primary antibody (anti-CD3), for B cens, macrophages and T cells, respectively. The cells present in the nodules were mostly T lymphocytes and macrophages. Very few B lymphocytes were also identified. Theileria annulata schizonts were also identified by IHC, through the use of two monoclonal antibodies (1C7 and 1C12) and one polyclonal antibody (R2185) anti-Theileria annulata. An ultrastructural (transmission electron microscopy) characterization of the lesions was performed and confirmed the presence of Theileria annulat≤a-like organisms in the cytoplasm of macrophages. A mitochondrial desoxirribonucleic acid (DNAmt) analysis (Dloop fragments hypervariable control region) was used to perform a preliminary assessment of the clonality of the cells identified in the lesions. Changes in different organs and tissues were finally considered as being the result of proliferation and dissemination of cytokine producing and schizont infected macrophages, which stimulate the uncontrolled and severe proliferation of T lymphocytes.