DSpace Collection:http://hdl.handle.net/10174/2542024-03-04T11:33:11Z2024-03-04T11:33:11ZAvaliação do potencial nematodicida de Bacillus spp. no nemátode das lesões radiculares Pratylenchus penetransMonteiro, Teresahttp://hdl.handle.net/10174/361952024-01-23T11:15:24Z2022-06-30T23:00:00ZTitle: Avaliação do potencial nematodicida de Bacillus spp. no nemátode das lesões radiculares Pratylenchus penetrans
Authors: Monteiro, Teresa
Abstract: O nemátode das lesões radiculares Pratylenchus penetrans é uma das espécies mais problemáticas deste grupo de nemátodes fitoparasitas, e encontra-se distribuída por todo o mundo. O uso de pesticidas é o principal sistema de proteção de culturas agrícolas utilizado para controlar os danos originados por estes parasitas. No entanto, o biocontrolo tem-se mostrado um método alternativo bastante eficaz. A contínua restrição do uso da maior parte dos pesticidas e ainda a procura de uma estratégia menos agressiva a nível ambiental demonstraram que existem agentes biológicos com potencial nematodicida, nomeadamente bactérias do gênero Bacillus, possíveis de integrar nas medidas de controlo dos nemátodes fitoparasitas. Neste contexto, o objetivo principal deste trabalho consistiu no estudo do potencial nematodicida de bactérias do género Bacillus no nemátode das lesões radiculares P. penetrans. Para atingir esta finalidade foram utilizadas metodologias em diversas áreas científicas: i) Microbiologia, como a preparação de meios de cultura sólidos e líquidos, obtenção de culturas puras de bactérias, crescimento de bactérias em meio líquido, e obtenção de extratos bacterianos por lise (lisados) e por filtração (filtrados); ii) Biologia molecular, como a extração, quantificação de gDNA, amplificação do gene 16S rRNA por PCR e posterior sequenciação Sanger; iii) Análise bioinformática de sequências para a construção de uma árvore filogenética; e iv) Nematologia, extração e quantificação de nemátodes e ensaios in vitro de lisados e filtrados bacterianos para avaliar o potencial nematodicida. Pela análise do gene marcador 16S rRNA foi possível identificar taxonomicamente alguns dos isolados estudados: o isolado MABNRO1 como Priestia aryabhattai, o isolado 4810 como Cytobacillus firmus, o isolado 14C48 como Paenibacillus lautus e o isolado 13C9 como Bacillus thuringiensis. Os restantes isolados foram identificados como pertencentes ao complexo de espécies Bacillus subtilis, sendo apenas referidos como Bacillus sp. Relativamente aos ensaios in vitro, observou-se que após 24h os lisados bacterianos de todos os isolados neste estudo não apresentavam qualquer efeito nematodicida no P. penetrans. Contudo, os filtrados bacterianos de alguns dos isolados apresentaram resultados promissores relativamente ao seu efeito nematodicida, nomeadamente o Bacillus sp. 14C2 e o 14C26, ambos do complexo da espécie Bacillus subtilis.2022-06-30T23:00:00ZAvaliação da expressão relativa de enzimas antioxidantes do nemátode fitoparasita Pratylenchus penetrans envolvidas na resposta ao composto orgânico 3-OctanolDe Bruijn, Joséhttp://hdl.handle.net/10174/361902024-01-23T11:14:56Z2023-06-30T23:00:00ZTitle: Avaliação da expressão relativa de enzimas antioxidantes do nemátode fitoparasita Pratylenchus penetrans envolvidas na resposta ao composto orgânico 3-Octanol
Authors: De Bruijn, José
Abstract: O nemátode das lesões radiculares (NLRs) Pratylenchus penetrans é um nemátode fitoparasita migratório capaz de infetar mais de 400 culturas com interesse agrícola. Em Portugal, o P. penetrans ataca principalmente a cultura da batata. Atualmente, não existe uma solução satisfatória para mitigar os seus estragos. O fitoquímico 3-octanol, produzido naturalmente em Origanum spp., Thymus zygis e Mentha arvenses, apresenta-se como uma possível solução neste sentido. Este trabalho teve como principal objetivo estudar o modo de ação como nematodicida do 3- octanol em P. penetrans, em particular o possível envolvimento da via antioxidante do nemátode. Foram estudados genes que codificam as principais enzimas antioxidantes do P. penetrans e avaliado a expressão dos mesmos na presença do composto nematodicida dissolvido em dois solventes (acetona, ACE; e dimetilsulfóxido, DMSO). O tratamento com 3-octanol, em ACE e em DMSO, provocou a inibição da transcrição de genes das vias antioxidantes à exceção do gene da tioredoxina no ensaio com ACE. Os próximos ensaios terão como foco as vias de detoxificação, às quais pertencem enzimas como a tiorredoxina.
Esta estratégia engloba-se no desenvolvimento de controlos seletivos que, por norma, exigem menos recursos causando menos efeitos colaterais para ecossistemas, para a saúde humana e salvaguardando as culturas agrícolas das pragas e doenças.2023-06-30T23:00:00ZValidação de genes relacionados com o parasitismo do nemátode da madeira do pinheiro, Bursaphelenchus xylophilus, através de hibridação in situ.Prates, Maria Catarinahttp://hdl.handle.net/10174/361452024-01-18T10:52:20Z2023-06-30T23:00:00ZTitle: Validação de genes relacionados com o parasitismo do nemátode da madeira do pinheiro, Bursaphelenchus xylophilus, através de hibridação in situ.
Authors: Prates, Maria Catarina
Abstract: O nemátode da madeira do pinheiro (NMP), Bursaphelenchus xylophilus, é um endoparasita migratório responsável pela doença da murchidão do pinheiro (DMP) que tem impacto na biodiversidade e economia do sistema florestal. Durante a interação com o seu hospedeiro, o NMP secreta diferentes tipos de proteínas, expressas na sua maioria nas glândulas esofágicas, que o ajudam na migração, supressão das defesas e manipulam da planta para o seu benefício. Com base num estudo anterior do transcriptoma das glândulas esofágicas, foram selecionados seis genes abundantemente expressos nestes tecidos. Neste trabalho pretende-se analisar, caracterizar preditivamente e validar um conjunto de potenciais genes envolvidos no parasitismo, utilizando várias técnicas de biologia molecular (amplificação por reação em cadeia de polimerase (PCR), eletroforese em gel de agarose e amplificação por reação em cadeira de polimerase com transcrição reversa quantitativa (RT-PCR)). Para compreender a sua possível função no parasitismo localizou-se a expressão dos genes candidatos nos tecidos do NMP, utilizado uma técnica de hibridação in situ.
Os seis genes candidatos foram validados no genoma e transcriptoma do NMP. Todas as proteínas codificadas têm a presença de um sinal peptídico no N-terminal que indica que, possivelmente, serão secretadas no hospedeiro. Os domínios das proteínas foram identificados como proteases aspárticas A1 (BUX_00713_957 e BUX_01281_82), endoglucanase (BUX_00397_6) e alfa amílase (BUX_00422_152). Para os genes BUX_00713_957, BUX_01281_82, BUX_00422_33, gene BUX_00422_152 foi possível detetar o sinal da sua expressão no intestino. Para o gene BUX_00397_6 (glicosil hidrolase família GH45) foi detetado um sinal nas glândulas esofágicas onde possivelmente é secretado pelo estilete e, uma vez no hospedeiro, terá a função de degradar a parede celular. Para o gene BUX_00351_434 não foi possível caracterizar-se o seu domínio proteico nem confirmar o tecido onde é expresso. Esta proteína pode ser específica deste nemátode e desempenhar um papel crucial no parasitismo. Neste sentido, a análise destas proteínas de parasitismo é importante para compreender a sua função na interação parasita-hospedeiro.2023-06-30T23:00:00ZCaracterização molecular de genes de parasitismo do nematode da madeira do pinheiro, Bursaphelenchus xylophilus, em interação com o hospedeiro.http://hdl.handle.net/10174/350792023-05-16T13:53:09Z2021-05-31T23:00:00ZTitle: Caracterização molecular de genes de parasitismo do nematode da madeira do pinheiro, Bursaphelenchus xylophilus, em interação com o hospedeiro.
Abstract: O nemátode da madeira do pinheiro (NMP), Bursaphelenchus xylophilus, é um agente patogénico que causa graves danos a várias espécies de coníferas (em Portugal, pinheiro-bravo), tendo um grande impacto na indústria madeireira e nos ecossistemas florestais. Estudos anteriores do transcriptoma do NMP permitiram identificar genes que estão significativamente expressos durante a infeção do hospedeiro, entre os quais estão genes que codificam proteínas com domínio de taumatina. O objetivo principal deste estudo foi a caracterização molecular deste grupo de genes e compreender de que forma poder o participar no parasitismo do NMP. Para atingir os objetivos espec ficos, foram realizadas várias técnicas de biologia molecular tais como o PCR convencional, RT-PCR e o SQ-RTPCR, clonagem, eletroforese em gel e sequenciação direta. O estudo funcional dos genes candidatos foi realizado atrav s dos ensaios de stress oxidativo e hibridação in situ. A amplificação dos genes a partir de gDNA validou três genes no genoma do NMP – BXY0122100, BXY0431000 e BXY431400. Os genes codificam três proteínas com domínio funcional pertencente à familia das taumatinas (IPR037176). A clonagem e sequenciação do gene candidato mais interessante - BXY0122100 - confirmou a sequ ncia predita. A localização destes genes no corpo do NMP mostra que BXY0431400 apresentou, possível, expressão no intestino. O NMP sobrevive após 24h de exposição ao agente oxidante H2O2 (a 15mM e a 30mM), havendo alteração da expressão dos três genes comparativamente ao controlo. Com este trabalho, concluiu-se que algumas taumatinas são expressas em diferentes tecidos do NMP o que poder indicar diferentes funções. No geral, as taumatinas podem estar relacionadas com a metabolização de compostos de stress oxidativo e estar envolvidos na interação com a planta hospedeira.2021-05-31T23:00:00Z