Indução e controlo da embriogénese somática a partir de embriões zigóticos maduros em oliveira (Olea europaea L.) cv.‘Galega vulgar’.

Abstract

Os trabalhos de transformação genética estão fortemente dependentes de protocolos eficientes de embriogénese somática, única forma de garantir a origem unicelular das plantas geneticamente modificadas. A garantia de regenerar uma planta geneticamente modificada a partir de uma única célula tornou este sistema de regeneração in vitro o mais apropriado para auxiliar em protocolos de transformação genética de plantas numa grande diversidade de espécies. Neste contexto, o estabelecimento de um protocolo eficiente de embriogénese somática deve ser tomado como a primeira conquista do sucesso da regeneração de uma planta transgénica. Na oliveira, a embriogénese somática foi alcançada com sucesso em várias cultivares, quando tecidos de origem juvenil foram usados como explante inicial. Os protocolos disponíveis, descrevem o uso de cotilédones e radículas, retirados de embriões zigóticos (imaturos e maduros), ou pecíolos retirados de plantas mantidas in vitro (ver revisão em Cardoso et al. 2019). Relativamente ao material adulto foi relatado um comportamento recalcitrante, porém, são exceções os trabalhos realizados por Rugini e Caricato (1995), nas cultivares ‘Canino’ e ‘Moraiolo’, a partir de pecíolos originados de rebentos adventícios e os de Mazri et al. (2013), na cultivar ‘Dahbia’ e de Toufik et al. (2014), na cultivar ‘Picual’, onde se utilizaram pecíolos e folhas excisados de plantas micropropagadas in vitro. Focado na validação de dados de estudos de transcriptómica, alcançados no âmbito de um projeto em execução (OLEAVALOR), e no uso potencial de metodologias de engenharia genética para auxiliar os programas de melhoramento em oliveira, foi realizado um trabalho de pesquisa para estabelecer um protocolo de embriogénese somática eficiente para a cultivar Portuguesa ‘Galega vulgar’. Esta cultivar é caracterizada por originar azeites de alta qualidade e ainda hoje é a mais representativa dos olivais tradicionais portugueses. Em contrapartida, apresenta vários problemas agronómicos que limitam muito o seu uso em olivais modernos de alta densidade, sendo importante o estabelecimento de uma linha de melhoramento para a sua valorização. O objetivo principal deste estudo foi dar um primeiro passo nessa direção, procurando obter um protocolo eficiente de embriogénese somática que poderá mais tarde ser utilizado na transformação genética desta cultivar. Com este objetivo, radículas e cotilédones excisados de sementes maduras foram utilizados para a realização dos ensaios. Foi desenvolvido com sucesso um protocolo para a regeneração via embriogénese somática e foi estabelecido com sucesso embriogénese somática repetitiva, disponibilizando material para ensaios de transformação genética. Os resultados permitiram obter perspetivas animadoras para o desenvolvimento de um protocolo baseado no uso de material adulto como explante inicial tendo em vista a transformação genética da cultivar.